Antikörper gegen native Proteine von Mycobacterium tuberculosis können Lungentuberkulose-Patienten erkennen

Scientific Reports Band 13, Artikelnummer: 12685 (2023) Diesen Artikel zitieren

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Genaue Point-of-Care-Tests (POCT) sind für die Behandlung von Tuberkulose (TB) von entscheidender Bedeutung. Die aktuelle Antikörper-basierte Diagnose weist jedoch eine geringe Spezifität und Sensitivität auf. Um geeignete Antigenkandidaten für die TB-Diagnose durch Antikörper zu finden, haben wir die Reaktion von IgGs auf Mycobacterium tuberculosis-Proteine bei Patienten mit Lungentuberkulose (PTB) untersucht. Wir verwendeten wichtige sekretierte Proteine wie Rv1860, Ag85C, PstS1, Rv2878c, Ag85B und Rv1926c, die direkt aus M. tuberculosis gereinigt wurden. Beim ersten Screening stellten wir fest, dass die IgG-Spiegel bei PTB-Patienten nur gegen Rv1860, PstS1 und Ag85B unter den getesteten Antigenen signifikant erhöht waren. Allerdings konnten rekombinantes PstS1 und Ag85B aus Escherichia coli (E. coli) PTB-Patienten und gesunde Kontrollpersonen (HC) nicht unterscheiden. Rekombinantes Rv1860 wurde aufgrund seiner geringen Expression nicht überprüft. Anschließend wurden die 59 bestätigten PTB-Patienten vom Soetomo General Academic Hospital, Surabaya, Indonesien, und 102 HC aufgrund der geringen Ausbeute an PstS1 aus M. tuberculosis nur auf Rv1860 und Ag85B getestet. Die ROC-Analyse mit nativem Ag85B und Rv1860 zeigte eine akzeptable Fläche unter der Kurve für die Diagnose, die 0,812 (95 %-KI 0,734–0,890, p < 0,0001) und 0,821 (95 %-KI 0,752–0,890, p < 0,0001) beträgt. Diese Studie zeigt, dass die Berücksichtigung der nativen Proteinstruktur der Schlüssel zur Entwicklung des POCT von Tuberkulose durch Antikörper-basierte Diagnose ist.

Tuberkulose (TB) ist eine Infektionskrankheit mit hoher Inzidenz, Prävalenz und Mortalität. Weltweit gab es im Jahr 2021 10,6 Millionen Tuberkulosefälle. Darüber hinaus gab es im Jahr 2021 1,6 Millionen Todesfälle, darunter Tuberkulosepatienten mit einer Komorbidität von HIV/AIDS. Die Sterblichkeitszahl unter HIV-negativen Menschen lag bei etwa 1,4 Millionen, die der HIV-positiven Menschen bei 187.0001,2,3. Im selben Jahr wurde auch berichtet, dass die 30 Länder mit der höchsten TB-Belastung in erster Linie Entwicklungsländer sind, auf die 87 % aller neuen Tuberkulosefälle weltweit entfielen3. Basierend auf diesen Daten ist Tuberkulose weltweit immer noch ein großes Gesundheitsproblem. Genaue, aber kostengünstige und einfache Point-of-Care-Tests auf Tuberkulose sind in Ländern, in denen Tuberkulose endemisch ist, gefragt, um diese tödliche Krankheit weltweit zu bekämpfen.

Die Sensitivität und Spezifität bisher etablierter kommerzieller Diagnosetools ist aufgrund ihrer inkonsistenten Ergebnisse bei der Diagnose von Tuberkulose fraglich. Darüber hinaus weisen die neueren Methoden zur TB-Diagnose einige Einschränkungen auf. Die M. tuberculosis-Kultur im Löwenstein-Jensen (LJ) oder im BACTEC™ MGIT™ 960-System ist zeitaufwändig, während Nukleinsäureamplifikationstests (NAATs) wie GeneXpert MTB/RIF teuer sind. Darüber hinaus empfiehlt die WHO (2015) nicht die Verwendung des Tuberkulin-Hauttests (TST) und des Interferon-Gamma-Release-Assays (IGRA) zur Diagnose aktiver Tuberkulose. Darüber hinaus können IGRA und TST das individuelle Risiko einer Tuberkuloseprogression nicht vorhersagen4,5. Die Immunantwort von Patienten mit Lungentuberkulose (PTB) hat jedoch das Potenzial, das Fortschreiten der Tuberkuloseerkrankung zu verfolgen.

Frühere Studien deuten darauf hin, dass eine asymptomatische Person in geringen Mengen Antikörper gegen Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis)-Antigene produziert. Im Gegensatz dazu weisen Patienten mit aktiver Tuberkulose erhöhte Antikörpertiter5,6,7 auf. Daher ist der Nachweis des Immunantwortprofils von Patienten gegen M.-tuberculosis-Antigene eine sinnvolle Möglichkeit, sowohl eine aktive Tuberkulose als auch das Fortschreiten der Tuberkulose aufgrund einer latenten Tuberkulose-Infektion (LTBI) zu diagnostizieren.

Bakterielle Infektionen können die zelluläre Immunität und die Sekretion von Antikörpern durch Plasmazellen aktivieren, um die Infektion zu bekämpfen. Frühere Daten zeigten, dass PTB-Patienten erhöhte Immunglobulintiter im Serum gegen mykobakterielle Antigene aufweisen; nur etwa 10 % verzeichneten keinen Anstieg8,9. Bisher entwickelte serologische Tests lieferten jedoch inkonsistente Ergebnisse mit stark schwankenden Sensitivitäts- und Spezifitätswerten. Dementsprechend werden kommerziell erhältliche Serodiagnosetests zum Nachweis von TB3,4 nicht empfohlen.

Mittlerweile können Antikörper zur Diagnose der meisten Infektionskrankheiten eingesetzt werden. Darüber hinaus kann der Nachweis einer Antikörperantwort schnell, einfach und kostengünstig durchgeführt werden. Dies macht es möglicherweise in Ländern mit hoher TB-Belastung nützlich, wenn es empfindlich und genau ist. IGRA, das zelluläre Reaktionen erkennt, ist umständlich, zeitaufwändig und teuer und wird in Ländern mit hoher TB-Belastung nur begrenzt eingesetzt. Darüber hinaus wurde gezeigt, dass der Anteil der Personen mit einem positiven IGRA-Test, die während der Nachuntersuchung an der Krankheit erkrankten, weniger als 10 % betrug3. Daher ist es notwendig zu wissen, warum der Nachweis von Antikörpern, die explizit gegen Krankheitserreger produziert werden sollen, nicht für eine genaue TB-Diagnose genutzt wird.

Es ist bekannt, dass sekretierte Proteine immundominant sind, da sie ohne bakterielle Störung direkt mit Immunzellen interagieren. In dieser Studie untersuchten wir die Antikörperreaktionen gegen wichtige sekretierte Proteine, die aus M. tuberculosis gereinigt wurden, wie Rv1860, Ag85C, PstS1, Rv2878c, Ag85B und Rv1926c, bei PTB-Patienten aus dem Soetomo General Academic Hospital, Surabaya, Indonesien. Wir haben uns entschieden, uns auf diese Proteine zu konzentrieren, weil sie entweder als wichtige sekretorische Proteine charakterisiert werden, stark immunogen sind oder immunstimulierende Komponenten der mykobakteriellen Zellmembran sind. Wir haben herausgefunden, wie wichtig die Verwendung nativer M. tuberculosis-Proteine bei der Antikörper-basierten TB-Diagnose ist.

Es wurden 59 Serumproben aus der Gruppe mit klinisch positivem Bakteriologietest positiv [C (+)–B (+)] und 102 Serumproben aus der HC-Gruppe entnommen (Abb. 1). Die meisten Patienten in der Gruppe C (+)–B (+) waren im Alter zwischen 55 und 64 Jahren (29 %). In dieser Studie gab es mehr weibliche Patienten, die einen höheren Prozentsatz an Tuberkulose-Infektionen hatten als männliche Patienten. Etwa 61 % der Patienten aus der Gruppe C (+)–B (+) waren Neuerkrankungen. Darüber hinaus hatten etwa 25 % der Patienten in der C (+)–B (+)-Gruppe eine ambulant erworbene Pneumonie (CAP) als Komorbidität (Tabelle 1).

Flussdiagramm des Studiendesigns und der Kategorisierung der Stichprobe.

Wir haben sekretierte Proteine wie Rv1860, Ag85C, PstS1, Rv2878c, Ag85B, Rv1926c und gereinigtes Proteinderivat (PPD) aus M. tuberculosis-Kulturfiltraten gereinigt und ihre Erkennung durch IgG aus PTB-Seren mittels ELISA getestet. Wir haben PPD als Kontrolle verwendet, da es die gesamten hitzeinaktivierten Kulturfiltrate von M. tuberculosis darstellt. Als vorläufige Studie wurde ein Screening an Seren von 30 PTB-Patienten von 59 PTB-Patienten des Soetomo General Academic Hospital und einer gleichen Anzahl von HC von 102 HC durchgeführt. Die IgG-Antikörperspiegel der Patientengruppe gegen PPD, Rv1860, PstS1, Ag85B und Ag85C waren signifikant höher als in der HC-Gruppe. Im Gegensatz dazu zeigten die IgG-Antikörpertiter gegen die Antigene Rv2878c und Rv1926c keine signifikanten Unterschiede zwischen PTB-Patienten und HCs (Abb. 2).

Grafik der IgG-Menge als Reaktion auf (a) Negativkontrolle (kein Protein, enthält 1x PBS), (b) PPD, (c) Rv1860, (d) Ag85C, (e) PstS1, (f) Rv2878c, (g) Ag85B und (h) Rv1926c geben die Serumantikörperkonzentration bei 30 PTB-Patienten und HC-Gruppen an. Die Ergebnisse wurden einzeln analysiert und die Daten als Mittelwert ± SD dargestellt.

Die ROC-Analyse ergab, dass PPD, Rv1860, Ag85B, PstS1 und Ag85C unter sieben Antigenen einen akzeptablen AUC-Wert aufwiesen (ergänzende Abbildung S1). Im Gegensatz dazu hatten Rv2878c und Rv1926c einen niedrigen AUC-Wert (Tabelle 2). Die Empfindlichkeit der IgG-Antikörperantwort auf die sieben Antigene lag zwischen 53,3 und 83,33 %. Darüber hinaus lag der positive Vorhersagewert (PPV) zwischen 69,57 und 95 % und der negative Vorhersagewert (NPV) zwischen 62,16 und 84,38 %. Statistische Ergebnisse zeigten, dass PPD, PstS1, Ag85B und Rv1860 das Potenzial haben, als Antigen für die Serodiagnose verwendet zu werden, da sie im Vergleich zu den anderen eine höhere Sensitivität, Spezifität, PPV und NPV aufwiesen. Obwohl Ag85C einen akzeptablen AUC-Wert hat, weist es eine geringe Empfindlichkeit auf (Tabelle 2). Zusammengenommen legen diese Daten nahe, dass IgGs einige, aber nicht alle Proteine bei aktiven PTB-Patienten erkennen.

Die unerwarteten, hochempfindlichen und spezifischen IgG-Spiegel gegen PstS1, Ag85B und Rv1860 bei PTB-Patienten veranlassten uns zu prüfen, ob ähnliche AUC-Werte bei der Verwendung rekombinanter Proteine aus Escherichia coli (E. coli) beobachtet werden können. Wir haben rekombinantes ePstS1 und eAg85B in E. coli ClearColi® BL21 exprimiert und gereinigt. Allerdings wurde Rv1860 nicht erfolgreich exprimiert, möglicherweise aufgrund der fehlenden posttranslationalen Modifikation in E. coli10. Daher war ein Vergleich mit dem nativen Protein nicht möglich. Anschließend bewerteten wir die IgG-Reaktionen der 30 PTB-Patienten und HC, ähnlich wie beim vorherigen Screening-IgG-Experiment, gegen rekombinante und native PstS1- und Ag85B-Antigene. Das Ergebnis zeigte, dass der IgG-Antikörpertiter gegen natives PstS1 und Ag85B bei PTB-Patienten signifikant höher war als bei HC. Im Gegensatz dazu zeigten rekombinantes PstS1 und Ag85B keine signifikanten Unterschiede zwischen den beiden Gruppen. (Abb. 3).

Grafik der IgG-Menge als Reaktion auf (a) Negativkontrolle (PBS 1x), (b) ePstS1, (c) PstS1, (d) eAg85B und (e) Ag85B-Antigen, was die Serumantikörperkonzentration bei 30 PTB-Patienten und HC anzeigt Gruppen. Die Ergebnisse wurden einzeln analysiert und die Daten als Mittelwert ± SD dargestellt.

Wir konnten anhand der IgG-Titer nicht zwischen PTB-Patienten und HC unterscheiden, wenn wir aus E. coli exprimierte rekombinante Proteine verwendeten. Im Fall von ePstS1 wurden in HC erhöhte IgG-Titer beobachtet. Im Fall von Ag85B reagierte eAg85B kaum mit IgG, das aus PTB-Patientenseren stammte. Dementsprechend zeigt die ROC-Analyse, dass der AUC-Wert von rekombinantem PstS1 und Ag85B niedriger war als bei nativen Proteinen, ebenso wie die Sensitivität, Spezifität, PPV und NPV (Tabelle 3; Abb. 4). Das Ergebnis dieses Vergleichs zeigte, dass das native Protein eine bessere Leistung erbrachte als die entsprechenden rekombinanten Proteine.

Receiver-Operator-Characteristic-Kurve (ROC) der IgG-Konzentration von (a) ePstS1, (b) PstS1, (c) eAg85B und (d) Ag85B-Antigen zwischen PTB-Patienten und einer gesunden Kontrollgruppe.

Diese Studie ergab, dass natives Rv1860, Ag85B und PstS1 gut mit IgGs von PTB-Patienten in getesteten gereinigten Proteinen reagierten. Wir setzten die weiteren Untersuchungen fort, indem wir IgGs gegen natives Ag85B und Rv1860 bei einer größeren Anzahl von Probanden (59 PTB-Patienten und 102 HC) untersuchten. Wir verwendeten natives Rv1926c als Kontrolle für Proteine mit geringer Immunogenität. Leider haben wir PstS1 aufgrund der geringen Ausbeute des nativen Proteins ausgeschlossen. Wir fanden heraus, dass die Konzentration von Antikörpern der IgG-Klasse gegen Ag85B und Rv1860 in der C (+)–B (+)-Gruppe signifikant höher war als in der HC-Gruppe (P < 0,05, Abb. 5). Antikörper gegen Rv1926c zeigten jedoch keinen Unterschied zwischen HC und C (+)–B (+) (Tabelle 4, ergänzende Abbildung S4).

Grafik der IgG-Menge als Reaktion auf (a) Ag85B, (b) Rv1860, was die Serumantikörperkonzentration in den Gruppen klinisch positiv – positiv im Bakteriologietest [C (+)–B (+)] und HC angibt. Die Ergebnisse wurden einzeln analysiert und die Daten als Mittelwert ± SD dargestellt. Die Receiver-Operator-Characteristic-Kurve (ROC) der IgG-Konzentration des (c) Ag85B- und (d) Rv1860-Antigens zwischen der klinisch positiven – bakteriologischen Test-positiven [C (+)–B (+)]-Gruppe und gesunden Kontrollpersonen zeigte, dass beide Antigene vorhanden waren akzeptablen Wert geben.

Die ROC-Analyse der drei Proteine zeigte, dass Ag85B und Rv1860 AUC-Werte von 0,812 (95 %-KI 0,734–0,890, p < 0,0001) und 0,821 (95 %-KI 0,752–0,890, p < 0,0001) aufwiesen (Tabelle 4, Abb. 5). ), die für die Diagnose akzeptabel sind, während Rv1926c einen niedrigen AUC-Wert aufwies (Tabelle 4). Basierend auf statistischer Analyse zeigten Ag85B und Rv1860 eine höhere Sensitivität, Spezifität, PPV und NPV als die anderen beiden Antigene. Der Empfindlichkeitswert von Ag85B und Rv1860 betrug 77,97 % bzw. 62,71 %. Während die Spezifität von Ag85B und Rv1860 etwa 82,35 % bzw. 93,41 % betrug (Tabelle 5).

Basierend auf den Daten wurde ein Venn-Diagramm erstellt, um die Beziehung der IgG-Menge zwischen Ag85B und Rv1860 im Vergleich zu Serumproben zu veranschaulichen. Das Venn-Diagramm zeigt, dass in der Gruppe C (+)–B (+) etwa 34 Patienten sowohl für Ag85B als auch für Rv1860 positiv waren (Abb. 6) und in Kombination eine Sensitivität von 83 % ergab. Andererseits wurden 81 Personen aus der HC-Gruppe negativ auf beide Antigene getestet, was zu einer kombinierten Spezifität von 79,4 % führte.

Venn-Diagramm zum Vergleich von Ag85B- und Rv1860-Datensätzen in (a) klinisch positiv – Bakteriologietest positiv [C (+)–B (+)] und (b) gesunder Kontrolle (HC).

Wir möchten zeigen, ob die Schwere der Erkrankung der Patienten ihre Antikörperreaktion beeinflusst. Daher überprüften wir die Korrelation zwischen dem IgG-Spiegel und der Schwere der Erkrankung des Probanden. Die Schweregradklasse (SC) der Patienten in dieser Studie wurde durch die Bandim-TB-Bewertung11,12 bestimmt. Bei dieser Bewertung wurden die Anzeichen und Symptome der Patienten beobachtet, um deren Schweregradklasse festzulegen. Die Daten zeigten, dass die meisten Patienten Husten- und Atemnotsymptome hatten, während einige einen BMI von weniger als 16 kg/m2 hatten (Tabelle 6).

Basierend auf den Krankenakten wurden C (+)–B (+)-Patienten in die schwerste Gruppe eingeteilt. Dreiunddreißig C (+)–B (+)-Patienten wurden in die SC 3-Gruppe eingeteilt (Tabelle 7). Darüber hinaus wurde die Korrelation zwischen Schweregradklasse und IgG-Reaktion von Spearman analysiert.

Die Ergebnisse der Spearman-Analyse zeigten keine Korrelation zwischen der Schwere der Erkrankung und der IgG-Reaktion des Patienten gegen Ag85B und Rv1860 (Tabelle 8). Abgesehen von diesen beiden Antigenen zeigte die statistische Analyse auch, dass die IgG-Reaktion gegen Rv1926c nicht mit dem Schweregrad des Forschungsobjekts korreliert (Tabelle 9). Zusammengenommen legen diese Ergebnisse nahe, dass der IgG-Spiegel gegen ein bestimmtes M. tuberculosis-Protein bei der Erkennung von Tuberkulose hilfreich sein kann, aber nicht den Tuberkulose-Erkrankungsstatus eines Patienten widerspiegelt.

Die Entwicklung einer schnellen und genauen TB-Diagnostik bleibt auch heute noch eine Herausforderung. Beim Goldstandard für die TB-Diagnose, der LJ-basierten Kultur, dauert es etwa vier bis acht Wochen, bis Ergebnisse vorliegen13. Mittlerweile dauert die Behandlung mit BACTEC™ MGIT™ 960 etwa 14 Tage, was eine rechtzeitige TB-Diagnose verhindert und die Tuberkulose-Kontrolle zu einer Herausforderung macht13. Die auf Antikörpern basierende Diagnose wird häufig zur Erkennung von Infektionskrankheiten eingesetzt14,15,16. Aufgrund seiner Schnelligkeit und Einfachheit könnte es auf die Tuberkulosediagnose angewendet werden, insbesondere in Ländern mit hoher Tuberkuloselast und niedrigem Einkommen, wenn die Sensitivität und Spezifität einen akzeptablen Wert haben. Darüber hinaus ist die Entnahme von Blutproben zum Antikörpernachweis einfacher als die Entnahme von Sputum, da Patienten manchmal Probleme beim Auswurf von Sputum haben13,14,15,16,17.

Über die Entwicklung von Diagnostika auf der Grundlage des Antikörpernachweises in Seren wird seit vielen Jahren berichtet, es besteht jedoch noch weiterer Forschungsbedarf. Das Ergebnis der Serodiagnose beim Nachweis aktiver PTB ist aufgrund unterschiedlicher Ergebnisse umstritten. Einige frühere Studien stützen jedoch die Ergebnisse dieser Forschung. Mehrere frühere Studien belegen, dass die Serodiagnose das Fortschreiten der TB-Erkrankung ausgehend von einer asymptomatischen Infektion verfolgen kann5,8,18,19,20.

Wir bewerteten die IgG-Spiegel im Vergleich zu gereinigten sekretierten Proteinen von M. tuberculosis und bestätigten, dass einige Proteine von IgG, das von PTB-Patienten produziert wurde, gut erkannt werden (Abb. 2 und 3). Unsere Ergebnisse zeigten, dass Ag85B und Rv1860 unter den getesteten Antigenen den höchsten AUC-Wert aufwiesen. Der AUC-Wert gibt die Genauigkeit eines Diagnosetests an. Die ROC-Kurve gilt als gut, wenn sie einen AUC-Wert von > 0,8021,22,23,24 aufweist. Ag85B und Rv1860 wiesen im Vergleich zu anderen Antigenen auch die besten Sensitivitäts-, Spezifitäts-, NPV- und PPV-Werte auf, was ihre potenzielle Verwendung als diagnostische Ziele unterstreicht. Das Ergebnis dieser Studie bestätigte eine erhöhte Produktion antigenspezifischer Antikörper bei PTB-Patienten.

Im Gegensatz zu unseren Erkenntnissen berichteten mehrere Studien, dass rekombinante Proteine als Biomarker für die TB-Diagnose ein Ergebnis liefern 5,18,24,25,26,27. Diese früheren Studien zeigten, dass Ag85B und Rv1860 potenziell als Biomarker bei der Diagnose des Fortschreitens der Tuberkulose eingesetzt werden können. Ag85B ist unter anderen Mykobakterienarten hochkonserviert28. Frühere serologische Studien zur Immunpolymerase-Kettenreaktion (I-PCR) zeigten, dass einige Proteine wie Ag85B, ESAT-6 und Nabelschnurfaktor gegen PTB zusammen mit extrapulmonaler Tuberkulose positive Ergebnisse zeigten29. Darüber hinaus wurden andere Proteine wie CFP-10, CFP-21, MPT-64 und PstS1 als potenzielle Ziele für I-PCR und quantitative Echtzeit-I-PCR (RT-I-PCR)30,31 hervorgehoben. Darüber hinaus ist Rv1860 ein gut beschriebenes sekretiertes Protein in M. tuberculosis und beeinflusst die Produktion von IFN-γ durch CD4+- und CD8+-T-Zellen10,32.

Unerwarteterweise stellten wir fest, dass native Proteine von IgGs besser erkannt wurden als die in E. coli produzierten rekombinanten Proteine, wie durch ELISA nachgewiesen wurde (Abb. 4). Diese Ergebnisse legen die Möglichkeit nahe, dass posttranslationale Modifikationen, die speziell bei M. tuberculosis auftreten, die Reaktionsfähigkeit von IgGs auf native M. tuberculosis-Proteine bestimmen. Es wird berichtet, dass Rv1860 an seinem Threonin an Position 27 glykosyliert ist, und diese posttranslationale Modifikation war entscheidend für die Erkennung des bei einem LTBI-Patienten etablierten CD8-T-Zellklons10. In ähnlicher Weise erfolgt die O-Glykosylierung bei PstS1 (38 kDa-Antigen)33. Es ist bekannt, dass diese posttranslational modifizierten Proteine stark immunogen sind. Es wird davon ausgegangen, dass Immunantworten, die artspezifische Veränderungen in den Proteinen von Krankheitserregern erkennen, Krankheitserreger genauer erkennen als die Erkennung von Proteinsequenzen allein und daher zu angemessenen Wirtsreaktionen gegen Infektionen führen können. Daher ist die genaue Erkennung durch die Immunantwort des Wirts auch für die Entwicklung einer Diagnosemethode hilfreich.

Ag85B wird auch ausführlich als hochimmunogenes sekretorisches Protein bei M. tuberculosis untersucht, über seine posttranslationale Modifikation wurde jedoch bisher nicht berichtet. Unsere vorläufigen Daten zeigten, dass denaturiertes Ag85B bei TB-Patienten immer noch eine Reaktivität mit IgGs aufweist. Dies legt nahe, dass Ag85B-spezifische IgGs keine dreidimensionalen Strukturen erkennen, sondern undefinierte posttranslationale Modifikationen, die auf Ag85B auftreten. Allerdings können wir die Möglichkeit nicht ausschließen, dass es bei der Expression in E. coli zu unnötigen obstruktiven posttranslationalen Veränderungen kommt. Obwohl wir noch weitere Forschung benötigen, um die genaue Ursache dieses Phänomens zu ermitteln, ist es klar, dass die Berücksichtigung der nativen Struktur der M. tuberculosis-Proteine von entscheidender Bedeutung für die Entwicklung einer auf Antikörpern basierenden TB-Diagnose ist.

Weltweit hatte Indonesien im Jahr 2021 die zweithöchste TB-Belastung mit einer hohen Gesamtinzidenzrate von 354 pro 100.000 Einwohner3. Es wird geschätzt, dass ein Viertel der Weltbevölkerung an LTBI leidet, wobei der Großteil davon aus Ländern mit Tuberkulose-Endemie wie Indonesien stammt. Daher war es nicht überraschend, dass zu den 102 gesunden Probanden, die in dieser Studie getestet wurden, auch Personen mit LTBI gehörten.

Der Antikörperspiegel korreliert mit der Menge an Antigenen; Daher spiegelt es das Fortschreiten und die Aktivität der Krankheit wider. In einer kürzlich durchgeführten Studie berichteten wir über nicht nachweisbare IgG-Werte gegen Ag85B bei einem Elefanten, bei dem LTBI diagnostiziert wurde. Allerdings stiegen diese Werte kurz vor dem Ausbruch der Tuberkulose, nach der Langzeitlatenz, stark an34. Es wurde nachgewiesen, dass steigende Antikörperspiegel möglicherweise das Fortschreiten der TB-Erkrankung bei asymptomatischen Infektionen beim Menschen verfolgen können5,18. Daher spekulieren wir, dass der beobachtete Anstieg der IgGs gegen Ag85B und Rv1860 bei HC auf ein TB-Entwicklungsrisiko in LTBI-Populationen hinweisen könnte.

LTBI ist eine bedeutende Quelle für Tuberkulose. Eine präzise, auf Antikörpern basierende TB-Diagnose kann möglicherweise nicht nur aktive Krankheiten erkennen, sondern auch das Risiko der TB-Entwicklung durch LTBI5,18. Als Fortsetzung dieser Studie wird eine longitudinale Kohortenstudie in Betracht gezogen, die Veränderungen der IGRA- und Antikörperspiegel in der LTBI-Bevölkerung in Indonesien untersucht.

Die Messung des Schweregrades bei PTB-Patienten erfolgte mit der Bandim-TB-Methode. Wir haben versucht, den Zusammenhang zwischen dem IgG-Spiegel und der Schwere der Erkrankung des PTB-Patienten zu überprüfen. Laut Rudolf12 handelt es sich bei Bandim-TB um eine einfache Methode, die in Ländern mit mittlerem bis niedrigem Einkommen eingesetzt wird. Die Methode hilft bei der Überwachung von PTB- oder MDR-TB-Patienten, die sich noch in der Medikationsphase befinden, und kann auch beim Screening von Tuberkuloseerkrankungen eine Rolle spielen12. Aus diesem Grund haben wir diese Methode zur Bestimmung des Schweregrads bei PTB-Patienten eingesetzt. In dieser Studie haben wir die Messung des mittleren Oberarmumfangs (MUAC) nicht einbezogen. Die Gesamtpunktzahl dieser Methode lag bei 13, wenn die MUAC-Messung einbezogen wurde, wurde in dieser Untersuchung jedoch auf 11 Punkte reduziert12.

Unsere Studie hat gezeigt, dass der Schweregrad der Erkrankung des Patienten keinen Einfluss auf seine IgG-Reaktion hat. In einer früheren Studie wurde außerdem berichtet, dass Bewertungsmethoden wie KPS, Bandim TB-Score 1 und Bandim TB-Score II nicht mit der Kavitätenerkrankung im Lungenröntgen korrelieren35. Im Gegenteil, Niki et al.18 zeigten einen signifikanten Zusammenhang zwischen IgA-Spiegeln und HrpA bei Patienten mit aktiver Erkrankung und einem klinischen Entzündungsstatus, gemessen durch „C-reaktives Protein (CRP) bei Eintritt“. Der Eintritt war als Zeitpunkt der Diagnose vor der Behandlung gemeint. Laut Niki et al.18 besteht jedoch weiterhin kein Zusammenhang zwischen den IgG-Titern und dem immunologischen Indikator und anderen von ihnen überprüften klinischen Indikatoren, wie etwa dem Schweregrad basierend auf der Röntgenart (Kavität) und der Röntgenausdehnung.

Über den Zusammenhang zwischen dem durch Bandim-TB ermittelten Schweregrad und der IgG-Reaktion wurde noch nicht berichtet. Basierend auf früheren Untersuchungen wurde gezeigt, dass der Ernährungszustand für die klinische Manifestation von Tuberkulose von entscheidender Bedeutung ist. Eine hohe Inzidenz und Prävalenz von Tuberkulose ist in Ländern mit mittlerem und niedrigem Einkommen häufiger zu beobachten als in Ländern mit hohem Einkommen. Daher könnte die Suche nach einem Zusammenhang zwischen Ernährungsstatus und IgG-Titern für zukünftige Forschung von großem Interesse sein18.

Bis heute rät die WHO immer noch von der Verwendung serologischer Tests zur aktiven Tuberkulosediagnose ab; Sie ermutigen jedoch dazu, weitere Forschung durchzuführen, um ihre Qualität zu verbessern4,26. Daher kann diese Forschung hoffentlich hilfreiche Informationen über die Bedeutung der Verwendung nativer Proteine für die Antikörper-basierte TB-Diagnose liefern. Nachfolgende Forschungen zu nativen M. tuberculosis-spezifischen Proteinen wie ESAT-6 und CFP-10 könnten wertvoll sein.

Basierend auf den präsentierten Ergebnissen kommen wir zu dem Schluss, dass kombinierte statt einzelner Antigentests eine gute diagnostische Strategie für die Entwicklung eines Serodiagnosetests sein könnten, der auch das Fortschreiten der Tuberkulose vorhersagen könnte. In Zukunft planen wir, die Sensitivität und Spezifität zwischen Serodiagnose und IGRA bei aktiven Tuberkulose-, latenten Tuberkulose-Infektions- (LTBI) und gesunden Menschen zu vergleichen. Darüber hinaus wird erwartet, dass der serologische Test auch die Diagnose anderer Arten von schwer zu diagnostizierender Tuberkulose unterstützt, wie zum Beispiel Fälle von abstrichnegativer Tuberkulose (PTB) und extrapulmonale Tuberkulose, einschließlich Tuberkulose-Pleuritis und Tuberkulose-Meningitis. Daher könnte die Entwicklung serologischer Tests zur Diagnose dieser Tuberkulosearten von großem Nutzen sein. Darüber hinaus ist es wichtig, die Vorhersage der posttranslationalen Modifikation der Proteine in M. tuberculosis weiter zu untersuchen.

Die vorliegende Studie ergab, dass natives Protein eine bessere Leistung erbrachte als rekombinantes. Die Untersuchungsergebnisse zeigten, dass das native Protein von M. tuberculosis als diagnostischer Kandidat für Tuberkulose von wesentlicher Bedeutung ist. Die Ergebnisse zeigten auch, dass natives Ag85B und Rv1860 besser als andere Proteine zwischen C (+)–B (+) und HC-Gruppen unterscheiden können.

Die Population dieser Studie umfasst 102 Patienten mit Verdacht auf Tuberkulose mit klinischen Symptomen aus dem Soetomo General Academic Hospital, Surabaya, Indonesien. Alle Patienten wurden mit TB-Diagnosetools untersucht und 59 Patienten, die positiv auf den GeneXpert MTB/RIF-Test (Cepheid, USA)36,37 oder/und auf säurefeste Bakterien (AFB) reagierten, wurden nachträglich als klinisch positiv – Bakteriologietest – ausgewählt positiv [C (+)–B (+)]. Während 43 Proben negative GeneXpert MTB/RIF-Ergebnisse zeigten, zeigten sie positive radiologische Ergebnisse und zeigten positive Anzeichen und Symptome von TB-Erkrankungen. Die 43 Proben wurden als klinisch positiv – bakteriologischer Test negativ [C (+)–B (–)] Patienten eingestuft. Obwohl diese Patienten die Kriterien für eine bakteriologische Diagnose nicht erfüllten, zeigten sie alle abnormale Ergebnisse bei der Röntgenuntersuchung des Brustkorbs, die ein positives TB-Ergebnis stützen. Der Arzt diagnostizierte bei ihnen aktive Tuberkulosepatienten und beschloss, ihnen eine Tuberkulosebehandlung zu geben38,39. Allerdings haben wir die 43 Proben eliminiert und uns auf 59 der Gruppe [C (+)–B (+)] konzentriert (Abb. 1), da wir nicht nachweisen konnten, dass sie TB-positiv waren.

Insgesamt wurden auch 102 Serumproben von gesunden Menschen oder gesunden Kontrollpersonen (HC) gesammelt, die keine TB-Symptome zeigten (Abb. 1). Die Altersspanne der HC wurde an die der Patienten mit Verdacht auf Tuberkulose angepasst. Somit handelt es sich bei dieser Studie um eine Fallkontrollstudie zur Altersübereinstimmung. Bei gesunden Probanden wurde eine Röntgenaufnahme des Brustkorbs durchgeführt, um zu bestätigen, dass sie nicht an Tuberkulose erkrankt waren.

Alle Methoden dieser Studie wurden gemäß den geltenden Richtlinien und Vorschriften umgesetzt. Das medizinische Personal des Soetomo General Academic Hospital sammelte alle in dieser Studie verwendeten Seren gemäß der Deklaration von Helsinki. Die Ethikkommission des Soetomo General Academic Hospital genehmigte die Studie mit der ethischen Freigabenummer 0410/KEPK/VII/2018. Die Einverständniserklärung wurde von allen Probanden oder ihren Erziehungsberechtigten eingeholt.

PPD wurde vom japanischen BCG-Labor (Tokio, Japan) gekauft. Darüber hinaus haben wir einige native Proteine aus M. tuberculosis gereinigt (ergänzende Abbildung S2). Diese Proteine wurden in einer früheren Studie unter Verwendung einer gereinigten Kulturbrühe von M. tuberculosis40 gewonnen. Bei weiterer Untersuchung wiesen Thioredoxin und Rv3803c jedoch eine geringe Konzentration auf, sodass wir sie von nachfolgenden Experimenten ausschließen.

Gene, die für die Proteine PstS1, Ag85B und Rv1860 kodieren, wurden zur Klonierung durch Polymerasekettenreaktionen (PCR) amplifiziert. Für die Expression von Ag85B, PstS1 und Rv1860 mit einem HIS-Tag an ihren C-terminalen Enden synthetisierten wir Primer mit 6 × HIS-Sequenz- und Restriktionsenzymstellen (Nde1 und EcoR1) und amplifizierten gezielte DNA-Regionen aus genomischer M. tuberculosis-DNA durch PCR. Zu den verwendeten Primern gehörten Ag85B-HIS vorwärts: 5′-CCCATATGTTCAGCCGTCCGGGTCTGCCGG-3′; Ag85B-HIS-Rückseite: 5'- CCGAATTCTATTAGTGGTGGTGGTGGTGATGACCCGCACCCAGGCTG-3'; PstS1-HIS vorwärts: 5′-CCCCATATGGGTTGCGGCAGCAAGCC-3′; PstS1-HIS Reverse: 5′-CCGAATTCTATTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGGCTGCTAATGGTCGCGATCAG-3′; und Rv1860-HIS vorwärts: 5′-CCCATATGGACCCGGAGCCGGCTCCGCC-3′; Rv1860-HIS Rückseite; 5′-CCGAATTCTATTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCGCCGGCAGGGTACGTTG-3′.

Amplifizierte DNAs wurden mit Nde1 und EcoR1 verdaut, was zu DNA-Fragmenten führte, die das Ag85B-, PstS1- oder Rv1860-Gen enthielten, die durch Fraktionierung mit Gelelektrophorese und anschließende Insertion an derselben Stelle in pET22b (+) (Novagen) gereinigt wurden. Nach Bestätigung der DNA-Sequenz jedes Expressionsvektors durch die Sanger-Methode wurden die Expressionsvektoren in ClearColi® BL21 transformiert. Transformanten wurden in 500 ml Luria-Bertani (LB)-Medium mit 50 µg/ml Carbenicillin bei 37 °C bis zu einer optischen Dichte von 0,5 kultiviert. Zur rekombinanten Proteinexpression wurde dann Isopropyl-β-d-1-thiogalactopyranosid (IPTG) bis zu einer Endkonzentration von 0,5 mM zugegeben und die Kultur eine weitere Stunde lang inkubiert.

Bakterienkulturen wurden sofort in Eis gekühlt und durch 10-minütige Zentrifugation bei 8000 g und 4 °C gesammelt. Nach Entfernen des Überstandes; Bakterienpellets wurden in 10 mM Tris-HCl und 300 mM NaCl-Puffer, pH 7,5, suspendiert und durch Ultraschallbehandlung unter Kühlung aufgebrochen. Die Proben wurden dann 10 Minuten lang bei 4 °C und 10.000 g zentrifugiert und solubilisierte Fraktionen und Pellets wurden getrennt. Zu diesem Zeitpunkt führten wir eine Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) durch und stellten fest, dass der Großteil von eAg85B und ePstS1 in den Pellets gefunden wurde. Andererseits konnten wir trotz mehrfacher Versuche die Expression von eRv1860 nicht nachweisen und konnten daher nicht mit seiner Reinigung fortfahren.

Die Pellets, einschließlich eAg85B und ePstS1, wurden in 10 mM Tris-HCl, 300 mM NaCl und 6 M Harnstoff gelöst und mit His GraviTrap™ (GE Healthcare Amersham Bioscience, UK) auf eine Ni-NTA-Säule aufgetragen und in Gegenwart gereinigt von 6 M Harnstoff gemäß den Anweisungen des Herstellers. Anschließend wurde die Harnstoffkonzentration durch Dialyse im Laufe einer Woche schrittweise von 6 auf 0 M gesenkt, um die Proteinrückfaltung zu erleichtern, und die Proben wurden schließlich in einer Lösung aus 10 mM Tris-HCl und 300 mM NaCl suspendiert. Das gereinigte ePstS1 und eAg85B wurden dann durch Elektrophorese analysiert (ergänzende Abbildung S3). Die Ergebnisse wurden durch Massenspektrometrie validiert (Ergänzende Abbildung S3).

Zur weiteren Identifizierung der gereinigten nativen Proteine aus M. tuberculosis und des rekombinanten Proteins (ePstS1 und eAg85B) aus E. coli wurde eine Proteomanalyse durchgeführt (Ergänzende Abbildungen S2 und S3). Die gereinigte Zubereitung der nativen Proteine und des rekombinanten Proteins wurde durch Elektrophorese auf einem Polyacrylamidgel aufgetrennt und dann mit Coomassie Brilliant Blue R250 angefärbt. Jede gereinigte Proteinbande wurde herausgeschnitten, reduziert und mit Dithiothreitol bzw. Iodacetamid alkyliert und wie zuvor beschrieben einem Trypsinverdau im Gel unterzogen41,42.

Die Trypsinverdaus wurden in 0,3 % Ameisensäure gelöst, durch einen 0,45 µM Membranfilter (Ultrafree-MC, Millipore) filtriert und im Direktinjektionsmodus auf einem Eksigent NanoLC 415 Nano-Flow-Flüssigkeitschromatographiesystem (AB Sciex, Framingham, MA, USA) unter Verwendung einer 75 µm × 150 mm C18-Sprühspitzensäule (3 µm, 120 Å, Nikkyo Technos, Tokio, Japan) gekoppelt mit einem TripleTOF5600 + Tandem-Massenspektrometer (AB Sciex).

Die mobile Phase A war 0,1 % Ameisensäure. Die mobile Phase B hingegen bestand aus 0,1 % Ameisensäure in Acetonitril. Peptide wurden durch einen 20-minütigen Gradienten von 2 % bis 32 % B bei 300 nL/min eluiert. Das MS-Spektrum und 10 MS/MS-Spektren wurden in einem datenabhängigen Modus mit einer zyklischen Zeit von 1,3 s erfasst. Die dynamische Ausschlusszeit wurde auf 8 s eingestellt. Die automatische Kalibrierung wurde alle 4–5 Proben unter Verwendung von 50 fmol Trypsinverdau aus Rinderserumalbumin (BSA) als Kalibriermittel durchgeführt (KYA Technology, Tokio, Japan).

Die von der Analyst TF 1.6-Software (AB Sciex) erzeugten Rohdaten wurden von MS Data Converter (AB Sciex) in generische Maskottchendateien konvertiert. Anschließend wurde mithilfe einer Mascot-Suchmaschine (Version 2.6, Matrix Science, Boston, MA, USA) anhand einer eigens erstellten Proteinsequenzdatenbank von Mycobacterium tuberculosis (Stamm ATCC25618/H37Rv) gesucht, die am 7. November 2016 von UniProt heruntergeladen wurde. Die Peptid- und MS/MS-Toleranzen wurden auf ± 20 ppm bzw. ± 0,1 Da festgelegt. Es waren maximal 2 fehlende Spaltungen zulässig. Die Modifikationen wurden wie folgt festgelegt: Carbamidomethylierung an Cystein war die feste Modifikation, während die Desamidierung von Asparagin oder Glutamin, die Oxidation von Methionin, N-terminales Glutamin zu Pyroglutamat und N-terminale Glutaminsäure zu Pyroglutamat als variable Modifikationen einbezogen wurden. Die angestrebte Falscherkennungsrate (FDR) wurde auf < 1 % festgelegt.

ELISA wurde verwendet, um die IgG-Konzentration von PTB-Patienten und HC gegen mehrere Proteine von M. tuberculosis zu bestimmen. Das Antigen wurde in Phosphatpuffer-Kochsalzlösung (PBS) 1 × pH 7,2 auf eine Konzentration von 5 μg/ml verdünnt. Die Mikroplatten (Maxisorp, Thermo Scientific Nunc, Dänemark) wurden dann über Nacht bei 4 °C mit den Antigenen beschichtet. Anschließend wurden die Platten mit PBS-Tween 20 gewaschen und dann mit 5 % Magermilch in PBS mit 0,05 % Tween 20 über Nacht bei 4 °C43 blockiert.

Der nächste Schritt bestand darin, 1:200 in PBS mit 0,05 % Tween 20 und 1 % Magermilch verdünnte Humanserumproben in Platten zu geben und 1 Stunde bei 37 °C zu inkubieren. Die Platten wurden dann 1 Stunde lang mit Ziegen-Anti-Human-IgG Fc-HRP (Southern Biotech, Kat.-Nr. 2048-05) in einer Verdünnung von 1:5.000 inkubiert. Als nächstes wurden 100 μl SureBlue Reserve-TMB (SeraCare, 5120-0083, USA) in jede Vertiefung gegeben. Nach 5-minütiger Inkubation im Dunkeln wurde die Reaktion durch Zugabe von 100 μl 1 N HCl gestoppt. Die Absorption wurde mit einem iMark™ Microplate Absorbance Reader (Bio-Rad) bei 450 nm43 abgelesen.

Die an dieser Studie teilnehmenden PTB-Probanden wurden klinisch untersucht und der Schweregrad ihrer Erkrankung anhand der modifizierten Bandim-TB-Bewertung klassifiziert. Die Bewertungskriterien basierten auf der klinischen Manifestation der Krankheit mit fünf Symptomen (Husten, Hämoptyse, Atemnot, Brustschmerzen und Nachtschweiß) und fünf Anzeichen (Anämie, Puls > 90 Schläge/Minute, positive Lungenauskultation, Körpertemperatur > 37 °C). C, Body-Mass-Index (BMI) < 18 oder < 16 kg/m2). In dieser Studie wurde der MUAC < 220 oder < 200 mm nicht berücksichtigt, da die Daten im Soetomo General Academic Hospital nicht verfügbar waren12,44.

Jede Variable ist einen Punkt wert; Insbesondere erhält die BMI-Variable einen zusätzlichen Punkt, wenn der BMI weniger als 16 kg/m2 beträgt, sodass die maximale Punktzahl 11 beträgt. In dieser Studie wurden drei Schweregradklassen basierend auf der Bandim-TB-Bewertung angewendet, nämlich: milde Klasse oder schwere Klasse 1 (SC 1) mit einer Punktzahl von 0–3, mittelschwere Klasse oder schwere Klasse 2 (SC 2) mit einer Punktzahl von 4–5 und schwere Klasse 3 (SC 3) mit einer Punktzahl von 6–1111.

Die statistischen Ergebnisse wurden mit dem Mann-Whitney-Test unter Verwendung von GraphPad Prism ver. analysiert. 9.5.1 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) und Ergebnisse mit p < 0,05 wurden als signifikant angesehen. Mit derselben Software wurden auch die ROC-Kurve (Receiver Operating Characteristic) und die Fläche unter der Kurve (AUC) mit 95 % KI für jedes Antigen berechnet. Der Youden-Index bestimmte die Sensitivität und Spezifität jedes Antigens43. Das Ergebnis der IgG-Reaktion mit der Schweregradklasse wurde mithilfe von Spearman by SPSS korreliert.

Die Datensätze dieser Studie sind auf begründete Anfrage beim entsprechenden Autor erhältlich.

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Wir möchten allen Mitgliedern der Abteilung für Bakteriologie der Niigata University School of Medicine danken. Wir möchten auch dem Ministerium für Forschung, Technologie und Hochschulbildung der Republik Indonesien danken. Zu guter Letzt danken wir dem Direktor des Soetomo General Academic Hospital, Surabaya, Indonesien, und dem Vorsitzenden des Instituts für Tropenkrankheiten, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesien.

Diese Arbeit wurde vom Research Program on Emerging and Re-emerging Infectious Diseases von AMED unter den Fördernummern JP18fk0108005 und 22fk0108129h0403, MEXT KAKENHI unter der Fördernummer 21KK0136 von MEXT und dem United States-Japan Cooperative Medical Science Program against Tuberculosis and Leprosy von Sohkichi Matsumoto unterstützt . Darüber hinaus wurde diese Studie durch den Zuschuss Nr. 200/UN3.14/LT/2018 der Generaldirektion für Hochschulbildung, des Ministeriums für Forschungstechnologie und der Republik Indonesien für Hochschulbildung unterstützt.

Abteilung für Bakteriologie, School of Medicine, Niigata University, Asahimachi-Dori 1-757, Chuo-ku, Niigata, 951-8510, Japan

Desak Nyoman Surya Suameitria Dewi, Kimika Hagino, Tomoya Yamazaki, Yuriko Ozeki, Haruka Kobayashi, Erina Inouchi, Yutaka Yoshida, Satoshi Ishikawa, Amina Kaboso Shaban, Yoshitaka Tateishi, Akihito Nishiyama und Sohkichi Matsumoto

Abteilung für Mikrobiologie, Medizinische Fakultät, Universität Ciputra, CitraLand CBD Boulevard, Made, Kec. Sambikerep, Surabaya, 60219, Indonesien

Nyoman Surya Suamitria Dewi drängte

Abteilung für Medizinische Mikrobiologie, Medizinische Fakultät, Airlangga University, Jl. Generalmajor Prof. DR. Moestopo 47, Surabaya, 60131, Indonesien

Hergestellt aus Mertaniasih und Sohkichi Matsumoto

Labor für Tuberkulose, Institut für Tropenkrankheiten, Airlangga University, Campus C Jl. Mulyorejo, Surabaya, 60115, Indonesien

Ni Made Mertaniasih

Subpulmonologische Abteilung für Innere Medizin, Medizinische Fakultät, Hang Tuah University, West Complex RSAL Dr. Ramelan, Jl. Gadung No.1, Jagir, Surabaya, 60111, Indonesien

Soedarsono

Abteilung für Biochemie, Fakultät für Veterinärmedizin, Gadjah Mada University, Jl. Fauna 2 Karangmalang, Yogyakarta, 55281, Indonesien

Wayan Tunas Artama

One Health/Eco-Health Resource Center, Gadjah Mada University, Jl. Teknika Utara, Barek, Sleman, Yogyakarta, 55281, Indonesien

Wayan Tunas Artama

Fukuyama Zoo, 276-1, Fukuda, Ashida-cho, Fukuyama, Hiroshima, 720-1264, Japan

Satoshi Ishikawa

Abteilung für Mykobakteriologie, Lepra-Forschungszentrum, Nationales Institut für Infektionskrankheiten, Aoba-cho 4-2-1, Higashimurayama-shi, Tokio, 189-0002, Japan

Manabu Ato

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DNSSD, NMM, S. und SM leiteten das Forschungsprojekt, entwarfen die Studie und konzipierten die Studie. DNSSD, NMM, S., KH, TY, YO, WTA, HK, EI, YY, SI, YT, AN, MA und SM haben die Ressourcen vorbereitet. DNSSD, HK, EI, YY und SM führten Experimente durch und analysierten die Ergebnisse. DNSSD und SM haben das Manuskript verfasst. Alle Autoren haben das Manuskript gelesen, überarbeitet und genehmigt.

Korrespondenz mit Desak Nyoman Surya Suamitria Dewi, Ni Made Mertaniasih oder Sohkichi Matsumoto.

Die Autoren geben an, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Dewi, DNSS, Mertaniasih, NM, Soedarsono et al. Antikörper gegen native Proteine von Mycobacterium tuberculosis können Lungentuberkulose-Patienten erkennen. Sci Rep 13, 12685 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-39436-4

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Eingegangen: 01. März 2023

Angenommen: 25. Juli 2023

Veröffentlicht: 04. August 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-39436-4

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Antikörper gegen native Proteine ​​von Mycobacterium tuberculosis können Lungentuberkulose-Patienten erkennen

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